iDifferen'ate A Tool for the Advancement of Stem Cell - - PowerPoint PPT Presentation

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Jun 03, 2023 214 likes •426 views

iDifferen'ate A Tool for the Advancement of Stem Cell Applica5ons Members present: Nick Goldner Rachel Nolte Logan Friedrich Stem cells

SLIDE 1

A ¡Tool ¡for ¡the ¡Advancement ¡of ¡ Stem ¡Cell ¡Applica5ons ¡ ¡

Members ¡present: ¡ Nick ¡Goldner ¡ Rachel ¡Nolte ¡ Logan ¡Friedrich ¡ ¡

iDifferen'ate ¡

SLIDE 2

Mul5potent ¡
Pluripotent ¡
Embryonic ¡
IPS ¡

Stem ¡cells ¡

SLIDE 3

iDifferen'ate ¡

Mul'ple ¡cell ¡lineage ¡assays ¡ Assay ¡specific ¡analysis ¡tools ¡ Integrate ¡wetware ¡and ¡ so;ware ¡ Expedite ¡bench-‑top ¡to ¡bed-‑ side ¡transi'on ¡ ¡

The ¡fundamental ¡model ¡ ¡

SLIDE 4

Leukocytes ¡ CNS ¡Tissue ¡ Endoderm, ¡Mesoderm, ¡Ectoderm ¡ SAVE ¡Assay: ¡Cardiomyocytes ¡

iDifferen'ate ¡ PlaKorm ¡

SLIDE 5

The ¡SAVE ¡Assay ¡

(Selec'on ¡of ¡Atrial ¡and ¡Ventricular ¡cardiomyocytes ¡through ¡Engineering) ¡

Design ¡and ¡produce ¡SAVE ¡assay ¡plasmids ¡ Transfect ¡Stem ¡Cells ¡ ¡ ¡ Induced ¡differen'a'on ¡ ¡ Atrial ¡cells ¡fluoresce ¡green, ¡and ¡ventricular ¡ cells ¡fluoresce ¡cyan. ¡ Analyze ¡

What ¡are ¡our ¡short-‑term ¡goals ¡for ¡this ¡project? ¡

SLIDE 6

SAVE ¡Assay ¡Plasmid ¡Maps ¡

ANF+eGFP+Puromycin ¡ (Indicates ¡Atrial ¡Cell) ¡ MLC2V+eCFP+Neomycin ¡ (Indicates ¡Ventricle ¡Cells) ¡

SLIDE 7

123456 ¡ ¡

The ¡SAVE ¡Assay ¡

Engineer ¡a ¡eukaryo'c ¡ selec'on ¡resistant ¡feeder ¡

layer. ¡

Design ¡assay ¡specific ¡analysis ¡

tools. ¡

Package ¡into ¡a ¡commercially ¡ viable ¡product. ¡

What ¡are ¡our ¡long-‑term ¡goals ¡for ¡this ¡project? ¡

SLIDE 8

The ¡iDifferen'ate ¡plaKorm ¡will ¡reduce… ¡

labor ¡intensity. ¡ 'me ¡required. ¡

expense. ¡

the ¡use ¡of ¡hazardous ¡chemicals. ¡ passage ¡number. ¡

SLIDE 9

Tradi5onal ¡Method ¡ ¡ ¡ ¡

SLIDE 10

Methods ¡

Plasmid ¡Engineering ¡ ¡

Transform ¡competent ¡ ¡cells ¡with ¡ Plasmid ¡ Dilu'on ¡Plate ¡

SLIDE 11

Methods ¡

Plasmid ¡Engineering ¡ ¡

Plasmid ¡Purifica'on ¡ Grow ¡up ¡in ¡LB ¡

SLIDE 12

Methods ¡

Plasmid ¡Engineering ¡ ¡

Restric'on ¡ Enzyme ¡ Diges'on ¡ Gel ¡Characteriza'on ¡

SLIDE 13

Methods ¡

Plasmid ¡Engineering ¡ ¡

DNA ¡Extrac'on ¡ From ¡Gel ¡ ¡ Liga'on ¡

SLIDE 14

Methods ¡

Plasmid ¡Engineering ¡ ¡

Gel ¡Characteriza'on ¡ Transforma'on ¡

SLIDE 15

¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ Obtain ¡Stem ¡Cells ¡

Methods ¡

Cell ¡Culture ¡ ¡

Plate ¡Stem ¡Cells ¡ ¡ Ca5onic ¡lipids ¡are ¡ conjugated ¡to ¡SAVE ¡ plasmids ¡ Form ¡Ca5onic ¡Lipids ¡ Plasmid ¡Complex ¡ ¡

SLIDE 16

Methods ¡

Cell ¡Culture ¡ ¡

¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ Transfect ¡Stem ¡Cell ¡with ¡ SAVE ¡Plasmids ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ Select ¡for ¡Successful ¡ Transfec5on ¡ ¡ ¡ Induce ¡ Differen5a5on ¡ ¡ ¡

SLIDE 17

Methods ¡

Cell ¡Culture ¡ ¡

¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ Characteriza5on ¡and ¡ Screening ¡of ¡Novel ¡ Induc5ve ¡Agents ¡ Analyze ¡fluorescence ¡ via ¡microscopy ¡ ¡ ¡

SLIDE 18

¡ ¡ ¡ ¡ ¡

Any ¡Ques5ons? ¡

SLIDE 19

Future ¡Direc5ons ¡

In-‑vivo ¡nega've ¡cell ¡selec'on ¡for ¡

misdifferen'a'on ¡and ¡nondifferen'a'on ¡

f ¡stem ¡cells ¡ ¡ ¡

iPure ¡

Pure ¡cell ¡type ¡specific ¡cultures ¡for ¡drug ¡

tes'ng ¡ ¡

Personalized ¡medica'on ¡screening ¡ ¡

iPharm ¡

SLIDE 20

¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Meet ¡the ¡WLC ¡iGEM ¡Team ¡

Dr. ¡Robert ¡Balza ¡

Faculty ¡Team ¡Leader ¡ Michelle ¡Hasse ¡ Lead ¡Engineer ¡ Rachel ¡Nolte ¡ Lab ¡Manager ¡ Nick ¡Goldner ¡ Team ¡Manager ¡ Research ¡Coordinator ¡ Logan ¡Friedrich ¡ Lab ¡Lackie ¡ Research ¡Lackie ¡ Steve ¡Van ¡Alstein ¡ Research ¡Lackie ¡ Vince ¡Jacobson ¡ Ethicist ¡