ENZYME- BRICK Scaffold Protein-mediated Assembly of - PowerPoint PPT Presentation

ENZYME- BRICK Scaffold ¡Protein-­‑mediated ¡Assembly ¡ of ¡immobilized ¡enzyme � NEAU iGEM 2015

? DNA ¡sequences ¡conform ¡to ¡a ¡restric;on-­‑enzyme ¡ assembly ¡standard. ¡ �

? ENZYME- BRICK Enzyme ¡conform ¡to ¡an ¡immobilized ¡enzyme assembly ¡standard. �

Cellulosic substrate � Easy to separate, transport, Efficient systems for store and automatize Cellulosic � degradation But, Utilize assembling Low specificity, high cost of protein scaffold purification,difficult to be Cell � immobilized. 
 MOTIVATION CONSTRUCTIO N

Cellulosic substrate � Cellulosic � cell � DESIGN

� laccase � � � Cohesin-­‑dockerin ¡interac;on � Rich ¡in ¡poly-­‑L-­‑proline � � Cellulose ¡binding ¡module � cellulose� DESIGN

CBM� CBM� cellulose� DESIGN ASSEMBLIN G

CBM� CBM� Rt Coh � CBM� Rt Doc � A cCoh � cellulose� Ac Doc � Laccas Linke e � r� DESIGN

CBM� CBM� Rt Coh � Rt Doc � Ac Coh � Ac Doc � Bc Coh � cellulose� Bc Doc � Laccase � Linke r� DESIGN

Three kinds of scaffolds and laccase Scaffold I CBM+Ac Coh� AcC AcC AcC CBM � oh oh oh Scaffold II Ac doc+ 3 Bc coh � BcCo BcCo BcCo AcDo h h h c Scaffold III Bc doc+ 3 Rt coh � BcD RtC oc oh Exogeneous enzyme: laccase+ Rt doc � laccase RtDo c RESULTS � 10 �

CBM and Cohesin-Dockerins work indeed in enzyme immobilization M ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡CONTROL ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡0 ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡SCAFFOLD ¡ ¡I ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡SCAFFOLD ¡ ¡II ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡SCAFFOLD ¡ ¡III � lysate � precipitant � supernatant � RESULTS � 11 �

enzyme ¡concentra;on � 2.5� 2� ug/ml � 1.5� 1� 0.5� 0� II-COH� II-2COH� II-3COH� II-4COH� RESULTS 10/21/15 �

u/g ¡ ¡(avicel) � Scaffold1 ¡ Scaffold2 ¡ Scaffold3 ¡ coh ¡amonts �

PARTS 10/21/15 �

More stable , ¡ specific substrate� FUTURE WORK �

Immobilization of metabolic pathway?� enzyme 1� enzyme 2� substrate � enzyme 3� enzyme 4� enzyme 5� product � FUTURE WORK�

WASTEWATER ¡TREATMENT � TEXTILE ¡INDUSTRY � APPLICATION

BIOREMEDIATION � PULP ¡BLEACHING � APPLICATION

ACHIEVEME NT

Instructors: ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof . ¡ Aoxue ¡Wang ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof. ¡Jie ¡Li ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof. ¡Jing ¡Li ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof. ¡Ji ¡Zhang ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof. ¡Xi ¡Bai ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof. ¡Fang ¡Gao � Sponsors: �

ACHIVEMENT e� cellulos � � � � � � � � � � � � � � � � � � � �