SLIDE 1
ENZYME- BRICK
NEAU iGEM 2015
Scaffold ¡Protein-‑mediated ¡Assembly ¡
- f ¡immobilized ¡enzyme
?
DNA ¡sequences ¡conform ¡to ¡a ¡restric;on-‑enzyme ¡ assembly ¡standard. ¡
ENZYME- BRICK Scaffold Protein-mediated Assembly of - - PowerPoint PPT Presentation
ENZYME- BRICK Scaffold Protein-mediated Assembly of - - PowerPoint PPT Presentation
ENZYME- BRICK Scaffold Protein-mediated Assembly of immobilized enzyme NEAU iGEM 2015 ? DNA sequences conform to a restric;on-enzyme assembly standard. ? ENZYME- BRICK
SLIDE 2
SLIDE 3
ENZYME- BRICK
?
Enzyme ¡conform ¡to ¡an ¡immobilized ¡enzyme assembly ¡standard.
SLIDE 4
Cellulosic substrate
Cellulosic
Cell
Easy to separate, transport, store and automatize But, Low specificity, high cost of purification,difficult to be immobilized. Efficient systems for degradation Utilize assembling protein scaffold
CONSTRUCTIO N MOTIVATION
SLIDE 5
Cellulosic substrate
Cellulosic
cell
DESIGN
SLIDE 6
cellulose
DESIGN
Cohesin-‑dockerin ¡interac;on Rich ¡in ¡poly-‑L-‑proline Cellulose ¡binding ¡module
- laccase
SLIDE 7
cellulose
CBM
CBM
ASSEMBLIN G DESIGN
SLIDE 8
cellulose
CBM
Laccas e Linke r RtCoh RtDoc AcCoh AcDoc CBM
CBM
DESIGN
SLIDE 9
cellulose
Laccase Linke r RtCoh RtDoc AcCoh BcCoh AcDoc BcDoc CBM
CBM
DESIGN
SLIDE 10
10
Three kinds of scaffolds and laccase
Scaffold I CBM+Ac Coh Scaffold II Ac doc+ 3 Bc coh Scaffold III Bc doc+ 3 Rt coh Exogeneous enzyme: laccase+ Rt doc
AcC
- h
CBM
BcCo h AcDo c BcD
- c
RtC
- h
laccase
RtDo c
RESULTS
AcC
- h
AcC
- h
BcCo h BcCo h
SLIDE 11
11
RESULTS
M ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡CONTROL ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡0 ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡SCAFFOLD ¡ ¡I ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡SCAFFOLD ¡ ¡II ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡SCAFFOLD ¡ ¡III
CBM and Cohesin-Dockerins work indeed in enzyme immobilization lysate supernatant precipitant
SLIDE 12
10/21/15
RESULTS
0.5 1 1.5 2 2.5
II-COH II-2COH II-3COH II-4COH
ug/ml
enzyme ¡concentra;on
SLIDE 13
u/g ¡ ¡(avicel)
coh ¡amonts
Scaffold1 ¡ Scaffold2 ¡ Scaffold3 ¡
SLIDE 14
10/21/15
PARTS
SLIDE 15
FUTURE WORK
More stable, ¡ specific substrate
SLIDE 16
FUTURE WORK
Immobilization of metabolic pathway?
enzyme 1 enzyme 2 enzyme 3 enzyme 4 enzyme 5
substrate
product
SLIDE 17
TEXTILE ¡INDUSTRY
WASTEWATER ¡TREATMENT
APPLICATION
SLIDE 18
BIOREMEDIATION PULP ¡BLEACHING APPLICATION
SLIDE 19
ACHIEVEME NT
SLIDE 20
Instructors: ¡ ¡ ¡ ¡
¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof. ¡Aoxue ¡Wang ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof. ¡Jie ¡Li ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof. ¡Jing ¡Li ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof. ¡Ji ¡Zhang ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof. ¡Xi ¡Bai ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡Prof. ¡Fang ¡Gao
Sponsors:
SLIDE 21
cellulos e
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