(���)����*������+������������,�-�%��. (���/�(������/�0����� ������������ ������������ ������������������� ��������������������� �!"#�!" �$! ��%�������&��������'��% Page 1
��������������������������������������� ��������������������������������������� Donor criteria Organ procurement Organ transport Tissue dissociation Islet purification Islet characterization Islet functional analysis Cell transplant Page 2
��������������������������������������� ��������������������������������������� Donor criteria Organ procurement Organ transport TISSUE DISSOCIATION Islet purification Islet characterization Islet functional analysis Cell transplant Page 3
��������������������������������������� ��������������������������������������� Donor criteria Organ procurement Organ transport TISSUE DISSOCIATION �����1����� 2������ �����1����� ��%�������� Page 4
�##�.��������1�� �������%�3����������������������.� 4��������)���������5 (���)����,�-�%��������(������� �������� �����1����� ����������������� �������������������� ������ ������������������� �������� ����!"����� ����!"� #�$���������%��� Page 5
��%���������6�� 7����������7 Liberase � � � � Crude Collagenase Enzyme Activities > 15 3 Degraded enzymes (C1, C2, NP) Endotoxin U/mg 300-7000 < 50 Lot to lot variation High: affected by Low: components fermentation purified then remixed conditions Page 6
���$.������������1�����1�2��������)��������� � � � � 8�� (���)����,�-�%��������������� � #�&��'� "�!����()�������*���)��� �������"�����������+��"�����*� #�!����� %� � �����)�����*��)�,��-�,.��/�������� 0��������1���������"��� � 2�����)�*���������*�����"������� ����/����������3��,���"�����*���� ��"���"������!�� � ����&�����!���/������*���������� )����$���4 � ��"���,�����&����)������)�!�� Isolation based on CI enzyme activity ���"�����"��������1������� �������������� � ,����"���)��������$����"�����*�,�� ��5��������/������)���!������"� ��������"������")��$���������������� ����/�����*�6���7�����(08����� �������7�����"� ���$ ��������"���������9�4:.��:.9 Page 7
���������9�1�����1�:��������)��������� � � � � 8��+������� �����*�%��;��<�=!.� ���"#�%�����/�$!���"�$�%�����>� �=�� (��� ;�������7������"�� ���! ��������������� 9�4<<:����. Page 8
(����%�������%���������1��������%�����)������������� � � � � �����������������##�/���������$������������ Presumptions in Status in 2009 1994 � R&D confirmed prior reports in the literature C1 + C2 + neutral protease key � Subsequent studies with islets mixed: rat islets Wolters showed C2 enzymes for tissue predominant role, Brandhorst showed C1 + C2 required, no islet recovered dissociation with C1 or C2 alone with NP � Report from Lakey’s lab indicated quality of C1 critical to success of islet isolation � Unanswered: Kin’s report indicates lower human islet yield with 50:50 Optimal C1:C2 ratio is 60:40 mixture mixture, best with 60:40 mixture � Brandhorst rat islet data show best result with 50:50 blend � Wunsch assay problematic: biased to C2 and no difference in specific Wunsch & anion exchange HPLC activity for intact or degraded C2 assays to assess � VitaCyte’s recent observation confirm value of analytical anion exchange collagenase activity HPLC � VitaCyte developed CDA assay detects C1 enzyme activity � Unanswered for HI: assay used to assess collagenase activity, purity of Product stable for 2 years at -20º collagenase???? � Analytical anion exchange HPLC & CDA assay provides better assessment of stability Page 9
:��������)������1����� ���������������)��� ������������)������� ������������������� ���%��������� ������������2�����1� �����1����������� ����������� Page 10
4����)������%�����1��������������������1���������������� �������/�%������������������������������������)���-�%�� Page 11
Recommend
More recommend