Outline Background Outreach, Conclusions, Future Work - - PowerPoint PPT Presentation

Outline

Outreach, ¡Conclusions, ¡ Future ¡Work ¡ Background ¡ Spider ¡silk-­‑GFP ¡ ¡fusion ¡protein ¡ The ¡First ¡Spider ¡ Silk ¡BioBricks ¡ Team ¡Goals ¡ Design ¡with ¡BioBricks ¡ Protein ¡PurificaBon ¡ 2 ¡

Orb-weaver spiders

• Include ¡over ¡10,000 ¡species ¡

and ¡make ¡up ¡about ¡25% ¡of ¡ spider ¡diversity ¡

• Argiope ¡auran,a ¡is ¡one ¡of ¡the ¡

major ¡orb ¡weavers ¡

• Common ¡to ¡North ¡and ¡Central ¡

America ¡

• Major ¡ampullate ¡dragline ¡silk ¡

is ¡one ¡of ¡the ¡six ¡solid ¡fibers ¡ produced ¡by ¡spider ¡silk ¡glands ¡

3 ¡

Types of silk

4 ¡

Properties of spider silk

Material ¡ Strength ¡(N ¡m-­‑2) ¡ ElongaBon ¡ (%) ¡ Energy ¡to ¡ break ¡(J ¡kg-­‑1) ¡ Dragline ¡silk ¡ 4000x106 ¡ 35 ¡ 40x104 ¡ Kevlar ¡ 4000x106 ¡ 5 ¡ 3x104 ¡ Rubber ¡ 1x106 ¡ 600 ¡ 8x104 ¡

• ¡As ¡strong ¡as ¡Kevlar, ¡7 ¡Nmes ¡more ¡elasNc ¡
• ¡5 ¡Nmes ¡larger ¡energy ¡to ¡break ¡than ¡rubber ¡
• ¡BiocompaNble ¡ ¡
• ¡Biodegradable ¡
• ¡Comparable ¡thermal ¡properNes ¡to ¡copper ¡ ¡

5 ¡

Potential spider silk applications

6 ¡

Outline ¡ Outreach, ¡Conclusions, ¡ Future ¡Work ¡ Background ¡ Spider ¡silk-­‑GFP ¡ ¡fusion ¡protein ¡ The ¡First ¡Spider ¡ Silk ¡BioBricks ¡ Team ¡Goals ¡ Design ¡with ¡BioBricks ¡ Protein ¡PurificaBon ¡

Motivation

Problem: ¡ ¡

• Spiders ¡are ¡territorial ¡and ¡cannibalisNc ¡so ¡

producing ¡spider ¡silk ¡in ¡‘spider ¡farms’ ¡is ¡not ¡an ¡

• pNon ¡
• Even ¡if ¡you ¡could ¡have ¡farms, ¡silk ¡collecNon ¡

would ¡be ¡difficult ¡

• The ¡mechanical ¡properNes ¡of ¡natural ¡silk ¡are ¡not ¡

ideal ¡for ¡all ¡applicaNons ¡ SoluNon: ¡Create ¡spider ¡silk ¡BioBricks ¡in ¡E.coli ¡

8 ¡

Our goals this year

• Manufacture ¡spider ¡silk ¡protein ¡in ¡E.coli ¡
• Manufacture ¡spider ¡silk ¡fibers ¡from ¡protein ¡ ¡
• Use ¡tRNAs ¡to ¡opNmize ¡spider ¡silk ¡producNon ¡

9 ¡

• Create ¡the ¡first ¡spider ¡silk ¡BioBrick ¡
• Create ¡a ¡method ¡of ¡purifying ¡spider ¡silk ¡that ¡is ¡

produced ¡in ¡E.coli ¡

• Create ¡spider ¡silk-­‑GFP ¡fusion ¡proteins ¡for ¡easy ¡

detecNon ¡of ¡products ¡

Outline ¡ Outreach, ¡Conclusions, ¡ Future ¡Work ¡ Background ¡ Spider ¡silk-­‑GFP ¡ ¡fusion ¡protein ¡ The ¡First ¡Spider ¡ Silk ¡BioBricks ¡ Team ¡Goals ¡ Design ¡with ¡BioBricks ¡ Protein ¡PurificaBon ¡

Spider silk proteins: a series of repeats

β ¡-­‑ ¡Sheets ¡ β ¡-­‑ ¡Spiral ¡ β ¡-­‑ ¡Helix ¡

11 ¡ β-spirals ¡and ¡β -helices act like springs giving the silk high elasticity.

(GGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGGQ)GPYGPSAAAAAA ¡

β -sheets give strength and stiffness properties to the fiber. U W

(GGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGGQ)(GGYGPGAGQQGPGSQGPGSGGQQGPGGQ)GPYGPSAAAAAA ¡

Spider silk amino acid composition

• Our ¡silk ¡gene ¡uses ¡only ¡six ¡of ¡the ¡twenty ¡different ¡

amino ¡acids ¡

• 44% ¡of ¡the ¡amino ¡acids ¡are ¡glycine, ¡so ¡having ¡enough ¡

intracellular ¡glycine ¡is ¡important ¡for ¡producNon ¡

Amino ¡Acid ¡ Count ¡ % ¡ComposiBon ¡ Glycine ¡(G) ¡ 30 ¡ 44.1 ¡ Glutamine ¡(Q) ¡ 12 ¡ 17.6 ¡ Proline ¡(P) ¡ 10 ¡ 14.7 ¡ Alanine ¡(A) ¡ 8 ¡ 11.8 ¡ Serine ¡(S) ¡ 5 ¡ 7.4 ¡ Tyrosine ¡(Y) ¡ 3 ¡ 4.4 ¡ 12 ¡

Designing a system to produce silk

• E. ¡coli ¡ ¡is ¡used ¡to ¡transform ¡the ¡spider ¡silk ¡plasmid ¡
• The ¡bacteria ¡works ¡hard ¡to ¡produce ¡the ¡silk ¡
• When ¡the ¡E. ¡coli ¡is ¡overworked ¡it ¡no ¡longer ¡has ¡

sufficient ¡tRNA’s ¡to ¡make ¡proteins ¡it ¡needs ¡to ¡survive, ¡ and ¡product ¡yield ¡decreases ¡

13 ¡

CmR ¡

Spider ¡silk ¡plasmid ¡

tRNA Supplementation

• Since ¡there ¡are ¡only ¡6 ¡different ¡amino ¡acids ¡in ¡spider ¡silk, ¡
• verexpression ¡of ¡the ¡silk ¡protein ¡may ¡lead ¡to ¡the ¡depleNon ¡
• f ¡charged ¡tRNA ¡molecules ¡in ¡the ¡cell, ¡prevenNng ¡the ¡cell ¡

from ¡making ¡proteins ¡

• Our ¡spider ¡silk ¡constructs ¡have ¡been ¡opNmized ¡to ¡use ¡only ¡

1 ¡or ¡2 ¡of ¡the ¡codons ¡for ¡each ¡amino ¡acid ¡

• By ¡supplying ¡these ¡extra ¡tRNA ¡genes, ¡we ¡can ¡increase ¡the ¡

intracellular ¡pool ¡of ¡the ¡needed ¡tRNAs, ¡and ¡hopefully ¡ increase ¡levels ¡of ¡spider ¡silk ¡producNon ¡

14 ¡

15 ¡

Spider silk sequence design

B1 Balanced tRNA, 2E construct Length: 204 bp

GGTGGATATGGTCCTGGAGCAGGTCAACAAGGAC CAGGTAGTCAAGGACCTGGTTCTGGAGGTCAACA AGGACCAGGTGGACAAGGTGGATATGGTCCTGGA GCAGGTCAACAAGGACCAGGTAGTCAAGGACCTG GTTCTGGAGGTCAACAAGGACCAGGTGGACAAGG TCCTTATGGACCAAGTGCAGCAGCAGCAGCAGCA

F1 Fewest tRNA, 2E construct, Length: 204 bp

GGTGGTTATGGTCCTGGTGCAGGTCAACAAGGTC CTGGTAGTCAAGGTCCTGGTAGTGGTGGTCAACA AGGTCCTGGTGGTCAAGGTGGTTATGGTCCTGGT GCAGGTCAACAAGGTCCTGGTAGTCAAGGTCCTG GTAGTGGTGGTCAACAAGGTCCTGGTGGTCAAGG TCCTTATGGTCCTAGTGCAGCAGCAGCAGCAGCA U1 Unoptimized 1E construct, Length: 120 bp GGCGGTTATGGTCCGGGCGCCGGCCAGCAAGGTC CGGGCAGCCAGGGTCCGGGCAGCGGTGGCCAACA GGGTCCGGGTGGTCAGGGGCCGTATGGTCCGAGC GCTGCGGCAGCGGCAGCT

W1 Unoptimized 2E construct, Length: 204 bp

GGCGGTTATGGTCCGGGCGCCGGCCAGCAAGGTC CGGGCAGCCAGGGTCCGGGCAGCGGTGGCCAACA GGGTCCGGGTGGTCAGGGCGGTTATGGTCCGGGC GCCGGCCAGCAAGGTCCGGGCAGCCAGGGTCCGG GCAGCGGTGGCCAACAGGGTCCGGGTGGTCAGGG GCCGTATGGTCCGAGCGCTGCGGCAGCGGCTGCA

GC% ¡= ¡75% ¡ GC% ¡= ¡75% ¡ GC% ¡= ¡55% ¡ GC% ¡= ¡55% ¡ All ¡available ¡in ¡the ¡registry ¡now! ¡

16 ¡

GGC ¡ ¡ ¡GGT ¡

tRNAs

DNA ¡construct ¡containing ¡the ¡ six ¡tRNAs ¡for ¡enhanced ¡spider ¡ silk ¡expression ¡in ¡‘F’ ¡construct ¡

P ¡ S ¡ G ¡ Q ¡ A ¡ Y ¡

G-­‑Glycine ¡(GGT ¡ ¡codon) ¡ Q-­‑Glutamine ¡(CAA ¡codon) ¡ P-­‑Proline ¡(CCT ¡codon) ¡ A-­‑Alanine ¡(GCA ¡codon) ¡ S-­‑ ¡Serine ¡(AGT ¡codon) ¡ Y-­‑Tyrosine ¡(TAT ¡codon) ¡ 17 ¡

P ¡ S ¡ G ¡ Q ¡ A ¡ Y ¡

tRNAs

DNA ¡construct ¡containing ¡the ¡ five ¡tRNAs ¡for ¡enhanced ¡spider ¡ silk ¡expression ¡in ¡‘B’ ¡construct ¡

To ¡help ¡with ¡ BioBrick ¡scar ¡

P ¡ S ¡ G ¡ T ¡ R ¡

G-­‑Glycine ¡(GGA ¡codon) ¡ P-­‑Proline ¡(CCA ¡codon) ¡ S-­‑ ¡Serine ¡(TCT ¡codon) ¡ T-­‑Threonine ¡(ACT ¡codon) ¡ R-­‑Arginine ¡(AGA ¡codon) ¡ 18 ¡

G ¡ P ¡ S ¡ A ¡ Q ¡ G ¡ P ¡ S ¡ Y ¡

The benefit of tRNAs ¡

• With ¡addiNonal ¡tRNAs ¡the ¡bacteria ¡should ¡be ¡able ¡to ¡

handle ¡our ¡spider ¡silk ¡BioBricks ¡

• The ¡tRNA ¡plasmid ¡is ¡pSB3K3 ¡

19 ¡

AddiBonal ¡ ¡tRNAs ¡

KanR ¡

AddiNonal ¡tRNA ¡plasmid ¡

Outline ¡ Outreach, ¡Conclusions, ¡ Future ¡Work ¡ Background ¡ Spider ¡silk-­‑GFP ¡ ¡fusion ¡protein ¡ The ¡First ¡Spider ¡ Silk ¡BioBricks ¡ Team ¡Goals ¡ Design ¡with ¡BioBricks ¡ Protein ¡PurificaBon ¡

Principles of Assembly

• Spider ¡Silk ¡Repeat ¡Units ¡

– Many ¡spider ¡silk ¡BioBrick ¡monomers ¡were ¡assembled ¡ to ¡create ¡longer ¡repeNNve ¡sequences ¡

• Added ¡Start ¡Codon ¡

– ¡Met ¡(ATG) ¡placed ¡before ¡first ¡Spider ¡Silk ¡repeat ¡unit ¡

• Added ¡Promoter ¡+ ¡RBS ¡

– BBa_K208010 ¡(Utah ¡State ¡iGEM ¡2009) ¡

• HisNdine ¡Tag ¡

– 10x ¡His-­‑tag ¡placed ¡aler ¡the ¡repeat ¡units ¡

21 ¡ ATG-­‑ ¡

1X ¡ 2X ¡ 3X ¡ 4X ¡ 5X ¡ 6X ¡ 7X ¡ 8X ¡ 9X ¡ 10X ¡ 11X ¡ 12X ¡ Promoter ¡+ ¡RBS ¡ BBa_K208010 ¡ Spider ¡silk ¡unit ¡ e.g. ¡Ba_K844001 ¡ BBa_K844002 ¡ BBa_K844003 ¡ BBa_K844004 ¡ His-­‑tag ¡ BBa_K844000 ¡

Addition of repeating units

atg ¡+ ¡Spider ¡silk ¡unit ¡ e.g. ¡ ¡BBa_K844005 ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡BBa_K844006 ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡BBa_K844007 ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡BBa_K844008 ¡

22 ¡

MassRuler ¡DNA ¡ladder ¡ Linearized ¡ pSB1C3 ¡ vectors ¡with ¡ spider ¡silk ¡ gene ¡insert ¡ cut ¡out ¡ ¡

B1 ¡ ¡ ¡ ¡B2 ¡ ¡ ¡ ¡B3 ¡ ¡ ¡ ¡B4 ¡ ¡ ¡ ¡B5 ¡ ¡ ¡ ¡B6 ¡ ¡ ¡ ¡B7 ¡ ¡ ¡ ¡B8 ¡ ¡ ¡ ¡B9 ¡ ¡ ¡ ¡B12 ¡ ¡ ¡B13 ¡ ¡B14 ¡

“Spider ¡Step” ¡Inserts ¡

F1 ¡ ¡ ¡ ¡F2 ¡ ¡ ¡ ¡ ¡F3 ¡ ¡ ¡ ¡ ¡F4 ¡ ¡ ¡ ¡F5 ¡ ¡ ¡ ¡F6 ¡ ¡ ¡ ¡ ¡F7 ¡ ¡ ¡ ¡F8 ¡ ¡ ¡ ¡F9 ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡“Spider ¡Step” ¡Inserts ¡

Linearized ¡ pSB1C3 ¡ vectors ¡with ¡ spider ¡silk ¡ gene ¡insert ¡ cut ¡out ¡

Spider steps

23 ¡

Improved His-tag

• 10x ¡His-­‑tag ¡has ¡been ¡reported ¡to ¡give ¡high ¡protein ¡ ¡

purity ¡aler ¡purificaNon ¡

• Usable ¡10x ¡His-­‑tag ¡did ¡not ¡exist ¡in ¡the ¡Parts ¡

Registry ¡

• Created ¡first ¡ever ¡10x ¡His-­‑tag ¡with ¡stop ¡codons ¡for ¡

use ¡as ¡C-­‑Terminal ¡fusion ¡[BBa_K844000] ¡ ¡HisHisHisHisHisHisHisHisHisHis ¡StopStop ¡ ¡catcatcaccatcaccaccatcatcaccattaataa ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡10x ¡HisNdine ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡2x ¡Stop ¡Codon ¡

24 ¡

Nickel Column

• Spider ¡silk ¡proteins ¡with ¡the ¡10x ¡His-­‑tag ¡were ¡

purified ¡using ¡a ¡resin ¡nickel ¡column ¡ ¡

25 ¡

26 ¡

Nickel Column

Outline ¡ Outreach, ¡Conclusions, ¡ Future ¡Work ¡ Background ¡ Spider ¡silk-­‑GFP ¡ ¡fusion ¡protein ¡ The ¡First ¡Spider ¡ Silk ¡BioBricks ¡ Team ¡Goals ¡ Design ¡with ¡BioBricks ¡ Protein ¡PurificaBon ¡

The first BioBrick Silk-GFP fusion protein

• To ¡demonstrate ¡the ¡possibility ¡of ¡fluorescently ¡tagging ¡

spider ¡silk, ¡the ¡F1 ¡spider ¡silk ¡protein ¡ ¡construct ¡was ¡ ¡ fused ¡to ¡GFP ¡

CmR ¡

atg ¡F1 ¡

patgF1GFP ¡ BBa_K844015 ¡

GFP ¡

BBa_K208000 ¡ BBa_K844007 ¡ BBa_K8208000 ¡ 28 ¡

Spider Silk GFP fusion protein

29 ¡

Outline ¡ Outreach, ¡Conclusions, ¡ Future ¡Work ¡ Background ¡ Spider ¡silk-­‑GFP ¡ ¡fusion ¡protein ¡ The ¡First ¡Spider ¡ Silk ¡BioBricks ¡ Team ¡Goals ¡ Design ¡with ¡BioBricks ¡ Protein ¡PurificaBon ¡

patgB4HT ¡ (BBa_K844016) ¡

CmR ¡ BBa_K844008 ¡ 3 ¡x ¡BBa_K844004 ¡ BBa_K844000 ¡ BBa_K208010 ¡

• 1. ¡E.coli ¡producing ¡

spider ¡silk ¡ ¡

Nickel ¡column ¡

• 2. ¡Purify ¡spider ¡silk ¡

using ¡Nickel ¡column ¡

• 4. ¡Spin ¡spider ¡silk ¡to ¡

make ¡fibers ¡

• 3. ¡Run ¡protein ¡gel ¡

to ¡verify ¡purity ¡ 31 ¡

Protein gel

32 ¡ Coomassie ¡blue ¡stained ¡SDS ¡PAGE ¡gel ¡

33 ¡

First spun spider silk from BioBricks

34 ¡

BioBrick parts

35 ¡

Additional Parts

U,W,F,B ¡-­‑ ¡different ¡spider ¡silk ¡subunits ¡ U# ¡-­‑ ¡where ¡# ¡is ¡the ¡number ¡of ¡repeated ¡units. ¡e.g. ¡U8 ¡means ¡there ¡ are ¡8 ¡repeats ¡ HT-­‑ ¡His-­‑tag ¡ P-­‑ ¡the ¡promoter ¡and ¡rbs, ¡Part:BBa_K208010 ¡ GFP-­‑ ¡Part:BBa_K208000 ¡ Note ¡that ¡* ¡indicates ¡that ¡the ¡part ¡has ¡been ¡submived ¡to ¡registry, ¡all ¡ parts ¡are ¡available ¡on ¡request ¡from ¡the ¡Utah_State ¡Team. ¡

36 ¡

Outline ¡ Outreach, ¡Conclusions, ¡ Future ¡Work ¡ Background ¡ Spider ¡silk-­‑GFP ¡ ¡fusion ¡protein ¡ The ¡First ¡Spider ¡ Silk ¡BioBricks ¡ Team ¡Goals ¡ Design ¡with ¡BioBricks ¡ Protein ¡PurificaBon ¡

High School Outreach

• Outreach ¡to ¡High ¡Schools ¡from ¡Utah ¡and ¡Idaho ¡ ¡

38 ¡

Discover ¡Biological ¡Engineering ¡

Engineering ¡State ¡

Next Year High School Outreach

• Teaching ¡the ¡principles ¡of ¡syntheNc ¡biology ¡with ¡

spider ¡ladders ¡

• Understanding ¡syntheNc ¡biology ¡can ¡be ¡hard ¡

especially ¡cloning ¡

• Use ¡spider ¡silk ¡genes ¡as ¡a ¡way ¡to ¡understand ¡

standard ¡assembly ¡and ¡cloning ¡principles ¡

39 ¡

Human Practices

40 ¡

• There ¡are ¡many ¡potenNal ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡ ¡

applicaNons ¡for ¡spider ¡silk ¡ which ¡can ¡directly ¡affect ¡

• ur ¡everyday ¡lives ¡
• We ¡believe ¡that ¡instead ¡of ¡

‘talking’ ¡about ¡syntheNc ¡ biology, ¡it ¡is ¡of ¡benefit ¡to ¡ society ¡if ¡we ¡demonstrate ¡ the ¡‘end ¡product’ ¡

• This ¡year ¡we ¡have ¡

produced ¡the ¡first ¡spider ¡ silk ¡threads ¡from ¡BioBricks ¡

“With ¡great ¡power, ¡comes ¡ great ¡responsibility...” ¡

• ­‑Uncle ¡Ben ¡

Collaborations

• We ¡collaborated ¡with ¡the ¡UC ¡Chile ¡Team ¡by ¡

providing ¡them ¡with ¡a ¡cyanobacterial ¡ transformaNon ¡vector ¡(BBa_K390000) ¡ ¡

• We ¡collaborated ¡with ¡the ¡Copenhagen ¡Team ¡by ¡

providing ¡them ¡with ¡a ¡cyanobacteria ¡promoter ¡ (BBa_K390008) ¡that ¡is ¡acNve ¡in ¡the ¡dark ¡

• We ¡contributed ¡to ¡TU ¡München’s ¡survey ¡

41 ¡

Acknowledgements

First ¡year ¡we ¡had ¡team ¡members ¡from ¡four ¡ different ¡insNtuNons: ¡

42 ¡

Logan ¡High ¡School, ¡UT ¡ Cooper ¡Union, ¡NY ¡ University ¡of ¡Utah, ¡UT ¡ Utah ¡State ¡University ¡

Team Successes

• First ¡ever ¡spider ¡silk ¡BioBrick ¡parts ¡
• First ¡spun ¡spider ¡silk ¡fiber ¡from ¡composite ¡

BioBrick ¡part ¡ ¡

• Developed ¡a ¡manufacturing ¡plaxorm ¡for ¡spider ¡

silk ¡producNon ¡

• Improved ¡His-­‑tag ¡for ¡bever ¡protein ¡purificaNon ¡
• First ¡spider ¡silk ¡GFP ¡fusion ¡protein ¡from ¡BioBrick ¡

parts ¡

• Successful ¡high ¡school ¡outreach ¡

43 ¡

Future Work

• Manufacture ¡larger ¡constructs ¡
• Compare ¡mechanical ¡properNes ¡
• f ¡constructs ¡of ¡different ¡sizes ¡
• SecreNon ¡of ¡spider ¡silk ¡
• Scale ¡up ¡with ¡bioreactors ¡

44 ¡

Sponsors

45 ¡

Questions?

46 ¡

Human Practices

40 ¡

“With ¡great ¡power, ¡comes ¡ great ¡responsibility...” ¡

• ­‑Uncle ¡Ben ¡

Ethical Considerations

• E. Coli

Containment Dual Use - Can this open source technology be used negatively? Product distribution avoiding E. coli contamination Public opinion Increase public support by producing a safe, beneficial product After silk production and collection,

• E. coli

cultures are autoclaved E.coli is used as the factory, but only purified silk is used to develop products Discussed the project with Research Integrity & Compliance Officer

G G Y G P G A G Q Q G P G S Q G P G S G GGTGGATATGGTCCTGGAGCAGGTCAACAAGGACCAGGTAGTCAAGGACCTGGTTCTGGA G Q Q G P G G Q G G Y G P G A G Q Q G P GGTCAACAAGGACCAGGTGGACAAGGTGGATATGGTCCTGGAGCAGGTCAACAAGGACCA G S Q G P G S G G Q Q G P G G Q G P Y G GGTAGTCAAGGACCTGGTTCTGGAGGTCAACAAGGACCAGGTGGACAAGGTCCTTATGGA P S A A A A A A CCAAGTGCAGCAGCAGCAGCAGCA

B ¡Construct ¡ F ¡Construct ¡

G G Y G P G A G Q Q G P G S Q G P G S G GGTGGTTATGGTCCTGGTGCAGGTCAACAAGGTCCTGGTAGTCAAGGTCCTGGTAGTGGT G Q Q G P G G Q G G Y G P G A G Q Q G P GGTCAACAAGGTCCTGGTGGTCAAGGTGGTTATGGTCCTGGTGCAGGTCAACAAGGTCCT G S Q G P G S G G Q Q G P G G Q G P Y G GGTAGTCAAGGTCCTGGTAGTGGTGGTCAACAAGGTCCTGGTGGTCAAGGTCCTTATGGT P S A A A A A A CCTAGTGCAGCAGCAGCAGCAGCA

48 ¡

References ¡

• hvp://www.carolinanature.com/spiders/blackandyellowargiope.html ¡
• hvp://scienceillustrated.com.au/blog/science/news/the-­‑safest-­‑pavern/ ¡
• hvp://pubs.acs.org/cen/science/85/8503sci1.html ¡
• Bridge Cables: http://www.winwallpapers.net/w1/2011/03/Golden-Gate-Bridge.jpg
• Airbags: ¡hvp://4.bp.blogspot.com/-­‑W__6FeTrx74/TqiVI7MDamI/AAAAAAAAAHg/

YRq2m6lSYUY/s1600/airbags.jpg/ ¡

• Sutures: ¡hvp://www.lotus-­‑surgicals.com/subcategoryimages/20090310022724_products1.jpg ¡
• Parachute: ¡hvp://sblazak.files.wordpress.com/2011/08/parachute1.jpg ¡
• Web: ¡hvp://lecyberpunk.deviantart.com/art/spider-­‑web-­‑vector-­‑157436131 ¡
• Body ¡Armor: ¡hvp://www.safeguardarmour.co.uk/media/catalog/product/cache/1/image/ ¡

¡9df78eab33525d08d6e5{8d27136e95/g/o/goretexreal_7.jpg ¡

• Performance ¡Wear: ¡hvp://www.usoutdoor.com/spyder/spyder-­‑silver-­‑dip-­‑dry-­‑web-­‑tneck/ ¡
• Tendons: ¡hvp://www.eorthopod.com/images/ContentImages/foot/foot_achilles/

foot_achilles_tendon_anatomy01a.jpg ¡

• Seatbelts: ¡hvp://www.sunwarrior.com/news/wp-­‑content/uploads/2012/08/seatbelt-­‑tesNng-­‑

sxc.jpg ¡

47 ¡